Extração de proteina

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Extração de proteínas totais de lavado peritoneal[editar | editar código-fonte]

Tampão de Extração de proteínas[editar | editar código-fonte]

TRIS-HCl 25mM pH = 7,4

NaCl 20mM

TWEEN-20 ou TRITON 100X 1% (detergentes)

Ácido Desoxicólico 1%(detergente optativo)

Água pura (Preferência Mili-Q estéril)q.s.p

Procedimento[editar | editar código-fonte]

Centrifugue o lavado 10.000G por 5min à 4°C;

Descarte o sobrenadante, tomando cuidado para não deixar cair o pellet no fundo;

Adicione 100uL a 1mL do Tampão de Extração (dependendo do tamanho do pellet);

Coloque no vortéx por 1min até o pellet ressuspender;

Centrifugue por 10.000G/ 5min/ 4°C;

Depois, cuidadosamente transfira o sobrenadante para outro tubo, tomando cuidado para não retirar o pellet;

Armazene o tubo a -80°C até posterior uso.

Observação: Devido o uso de solução detergente para a extração, a quantificação com o reagente Bradford se torna ineficaz.