Engenharia genética/Microscopia de fluorescência e SDS-PAGE

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Preparação para SDS-PAGE[editar | editar código-fonte]

  • Agitar a amostra durante 10-20 segundos;
  • Preparar dois eppendorfs com 20 μL de Tampão de amostra SDS;
  • Adicionar 20 μL de amostra aos dois eppendorfs com 20 μL de Tampão de amostra SDS (não transferir restos celulares!);
  • Aquecer os eppendorfs durante 5 minutos;
  • Carregar 10 μL da mistura no SDS-PAGE;
  • Deixar o gel correr entre 30 minutos a 1 hora, a 200 V;

Preparação para Microscopia de Fluorescência[editar | editar código-fonte]

  • Preparar três eppendorfs com 1 mL de água em cada;
  • Picar três colónias da placa marcada (+) e ressuspender cada colónia num dos eppendorfs;
  • Colocar 10 μL de cada tubo numa lâmina para microscópio;
  • Colocar uma lamela sobre o líquido;
  • Desenhar os primers que foram usados para a amplificação do gene GFP com a adição das sequências necessárias para o gap-repair.

Conceitos Básicos[editar | editar código-fonte]

SDS-PAGE é uma técnica usada em bioquímica, genética e biologia molecular para separar proteínas de acordo com a sua mobilidade electroforética.

Ligações Externas[editar | editar código-fonte]

Electrophoresis - Molecular Weight Determination by SDS-PAGE

Mini-PROTEAN® II Electrophoresis Cell Instruction Manual

Laemmli Sample Buffer

Protein Standards